1. لیز سلولی و دناتوره شدن پروتئین
در مرحله اولیه استخراج DNA پلاسمید، سلول ها باید لیز شوند تا DNA داخل آن آزاد شود. این فرآیند معمولاً با استفاده از غلظت های بالای نمک، مواد شوینده یا آنزیم ها به دست می آید. در این فرآیند، نقش اصلی تریس ثابت نگه داشتن pH محلول است، بنابراین DNA را از محیط اسیدی تولید شده در طول فرآیند لیز محافظت می کند. علاوه بر این، تریس همچنین می تواند با اتصال به پروتئین ها و دناتوره کردن آنها به جداسازی DNA از لیزات کمک کند.
2. حل شدن و تثبیت DNA
پس از لیز سلولی، DNA پلاسمید باید لیز شده و از سایر اجزای سلولی جدا شود. این فرآیند معمولاً با استفاده از غلظت بالایی از نمک یا مواد شوینده انجام می شود. در این فرآیند، نقش اصلی تریس فراهم کردن یک محیط مناسب یونی و pH برای ارتقای انحلال و تثبیت DNA است. گروه های هیدروکسیل و آمینو تریس می توانند پیوندهای هیدروژنی و یونی با مولکول های DNA ایجاد کنند که ساختار آن را تثبیت کرده و از تخریب آن جلوگیری می کند. علاوه بر این، تریس می تواند با مهار فعالیت نوکلئازها، DNA را از تخریب بیشتر محافظت کند.
3. خالص سازی و بازیابی DNA
پس از جداسازی DNA پلاسمید از لیز، یک سری مراحل تصفیه اغلب برای حذف پروتئین های باقیمانده، RNA و سایر ناخالصی ها مورد نیاز است. این مراحل شامل استخراج فنل/کلروفرم، رسوب اتانول و غیره است. در این فرآیند، نقش اصلی تریس ثابت نگه داشتن pH محلول است، در نتیجه از DNA در برابر محیط اسیدی یا قلیایی که ممکن است در طی تصفیه ایجاد شود، محافظت می کند. علاوه بر این، Tris همچنین می تواند با اتصال به ناخالصی ها و اجازه رسوب دادن به آنها، به بازیابی DNA پلاسمید خالص از محلول کمک کند.
